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當前位置:首頁   >  產品中心  >  PCR試劑盒  >  普通PCR檢測試劑盒  >  1499185南沙參染料法PCR鑒定試劑盒

南沙參染料法PCR鑒定試劑盒

簡要描述:南沙參染料法PCR鑒定試劑盒,雅吉生物是一家生物企業主營ATCC細胞,細胞系,原代細胞,重組蛋白,ELISA試劑盒、免疫組化試劑盒、抗體、熒光定量PCR檢測試劑盒、動物血清和培養試劑等

  • 產品型號:1499185
  • 廠商性質:生產廠家
  • 更新時間:2025-07-03
  • 訪  問  量:321

詳細介紹

本產品僅供科研,不得做其它用途

更多產品詳細信息可向客服免費索取訂購

本產品就是根據PCR原理專門開發的試劑盒,它具有下列特點:

1. 即開即用,用戶只需要提供樣品DNA模板。

2. 提供陽性對照,便于區分假陰性樣品。

3. 產品精心優化且特異性高,引物是根據高度保守區設計,不會跟除此之外的其它微生物DNA發生交叉反應。

4. PCR mix中含上樣染料,PCR后可以直接上樣電泳。

5. 本產品足夠50次20μL體系的PCR反應。

6. 本產品只能用于定性實驗,不能用于定量。

7. 本產品只能用于科研


南沙參染料法PCR鑒定試劑盒【試劑盒組成

序號

組成

50T/盒

1

RT-PCR反應液

875 μL×1管

2

  混合酶液

125 μL×1管

3

  陽性對照

40 μL×1管

4

  C 陰性對照

40 μL×1管

5

說明書

1份








【儲存條件及有效期】避光-20℃以下保存,避免反復凍融,有效期12個月。

定義和原理

PCR 探針法試劑盒是基于聚合酶鏈式反應(PCR)技術,結合探針來檢測特定核酸序列的工具包。其原理是在常規 PCR 基礎上,加入了一段能與目標核酸序列特異性結合的熒光標記探針。在 PCR 擴增過程中,當探針與目標序列結合后,通過熒光信號的變化來實時監測 PCR 產物的擴增情況。

主要組成成分

探針:帶有熒光基團和淬滅基團,在完整狀態下,淬滅基團抑制熒光基團的熒光信號。當探針與目標序列結合并被核酸酶切割后,熒光基團和淬滅基團分離,從而產生熒光信號。

DNA 聚合酶:負責在引物的引導下,將脫氧核苷酸(dNTPs)逐個添加到引物的 3' 端,合成新的 DNA 鏈。

dNTPs:即脫氧核苷三磷酸,包括 dATP、dTTP、dCTP 和 dGTP,是合成 DNA 的原料。

反應緩沖液:為 PCR 反應提供適宜的 pH 值、離子強度等環境條件,保證 DNA 聚合酶的活性和反應的順利進行。

常見類型

TaqMan 探針法試劑盒:TaqMan 探針是一種寡核苷酸探針,其 5' 端標記熒光報告基團,3' 端標記淬滅基團。在 PCR 擴增過程中,Taq DNA 聚合酶的 5'-3' 外切酶活性會將與目標序列結合的探針切割,使熒光報告基團和淬滅基團分離,熒光信號增強。通過檢測熒光信號的強度,可以實時監測 PCR 產物的擴增情況。

分子信標探針法試劑盒:分子信標是一種具有發夾結構的寡核苷酸探針,其兩端分別標記熒光報告基團和淬滅基團。在沒有目標序列存在時,分子信標呈發夾結構,熒光報告基團和淬滅基團靠近,熒光信號被淬滅。當存在目標序列時,分子信標與目標序列雜交,發夾結構打開,熒光報告基團和淬滅基團分離,產生熒光信號。

2. 樣品制備

DNA提取:使用適合的DNA提取試劑he提取待測樣品中的DNA,確保DNA的純度和完整性。

樣品處理:樣品需在0-4℃條件下處理,避免RNA降解,并在實驗后立即檢測或儲存于-20℃。

3. 反應體系構建

反應管標記:根據實驗需求,標記N+9或N+4個PCR管,其中N為樣品數量,+9或+4分別用于標準曲線、陰性對照和陽性對照。

加入試劑:

每孔加入25μL反應體系,包括模板DNA、引物、探針、dNTPs、Taq酶等。

陽性對照和陰性對照分別加入不同濃度的標準品或無DNA的溶液。

4. PCR擴增

初始變性:95℃預變性3分鐘。

循環擴增:

溫度設置:95℃(變性)15秒,60℃(退火)30秒,72℃(延伸)1分鐘。

循環次數:通常為40次,每次循環后收集熒光信號。

熒光信號檢測:在60℃退火階段收集FAM通道的熒光信號,實時監控擴增過程。

5. 數據分析

定量分析:

繪制標準曲線:以陽性對照濃度的log值為橫軸,Ct值為縱軸,計算待測樣品的DNA濃度。

根據待測樣品的Ct值推算其濃度。

定性分析:

陰性對照無Ct值或Ct值≥40,陽性對照有典型擴增曲線且Ct值<40,待測樣品根據Ct值判斷陽性或陰性。

6. 結果驗證

必要時進行驗證實驗:如凝膠電泳檢測PCR產物大小,確保實驗結果的可靠性。

注意事項

實驗環境:實驗應在超凈工作臺或生物安全柜內進行,避免污染。

個人防護:佩戴一次性手套、口罩和無塵工作服,避免直接接觸試劑。

試劑保存:所有試劑需避光保存,避免反復凍融。

廢棄物處理:實驗后廢棄物需無害化處理

歡迎新老客戶垂詢訂購:南沙參染料法PCR鑒定試劑盒


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