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當(dāng)前位置:首頁(yè)   >  產(chǎn)品中心  >  PCR試劑盒  >  普通PCR檢測(cè)試劑盒  >  1533622齒瓣石斛探針?lè)晒舛縋CR試劑盒

齒瓣石斛探針?lè)晒舛縋CR試劑盒

簡(jiǎn)要描述:齒瓣石斛探針?lè)晒舛縋CR試劑盒,雅吉生物是一家生物企業(yè)主營(yíng)ATCC細(xì)胞,細(xì)胞系,原代細(xì)胞,重組蛋白,ELISA試劑盒、免疫組化試劑盒、抗體、熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒、動(dòng)物血清和培養(yǎng)試劑等

  • 產(chǎn)品型號(hào):1533622
  • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
  • 更新時(shí)間:2025-04-16
  • 訪  問(wèn)  量:185

詳細(xì)介紹

本產(chǎn)品僅供科研,不得做其它用途

更多產(chǎn)品詳細(xì)信息可向客服免費(fèi)索取訂購(gòu)

本產(chǎn)品就是根據(jù)PCR原理專(zhuān)門(mén)開(kāi)發(fā)的試劑盒,它具有下列特點(diǎn):

1. 即開(kāi)即用,用戶只需要提供樣品DNA模板。

2. 提供陽(yáng)性對(duì)照,便于區(qū)分假陰性樣品。

3. 產(chǎn)品精心優(yōu)化且特異性高,引物是根據(jù)高度保守區(qū)設(shè)計(jì),不會(huì)跟除此之外的其它微生物DNA發(fā)生交叉反應(yīng)。

4. PCR mix中含上樣染料,PCR后可以直接上樣電泳。

5. 本產(chǎn)品足夠50次20μL體系的PCR反應(yīng)。

6. 本產(chǎn)品只能用于定性實(shí)驗(yàn),不能用于定量。

7. 本產(chǎn)品只能用于科研

齒瓣石斛探針?lè)晒舛縋CR試劑盒

齒瓣石斛探針?lè)晒舛縋CR試劑盒樣品的制備 

試劑盒組成

序號(hào)

組成

50T/盒

1

RT-PCR反應(yīng)液

875 μL×1管

2

  混合酶液

125 μL×1管

3

  陽(yáng)性對(duì)照

40 μL×1管

4

  C 陰性對(duì)照

40 μL×1管

5

說(shuō)明書(shū)

1份








【儲(chǔ)存條件及有效期】避光-20℃以下保存,避免反復(fù)凍融,有效期12個(gè)月。

定義和原理

PCR 探針?lè)ㄔ噭┖惺腔诰酆厦告準(zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)技術(shù),結(jié)合探針來(lái)檢測(cè)特定核酸序列的工具包。其原理是在常規(guī) PCR 基礎(chǔ)上,加入了一段能與目標(biāo)核酸序列特異性結(jié)合的熒光標(biāo)記探針。在 PCR 擴(kuò)增過(guò)程中,當(dāng)探針與目標(biāo)序列結(jié)合后,通過(guò)熒光信號(hào)的變化來(lái)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè) PCR 產(chǎn)物的擴(kuò)增情況。

主要組成成分

探針:帶有熒光基團(tuán)和淬滅基團(tuán),在完整狀態(tài)下,淬滅基團(tuán)抑制熒光基團(tuán)的熒光信號(hào)。當(dāng)探針與目標(biāo)序列結(jié)合并被核酸酶切割后,熒光基團(tuán)和淬滅基團(tuán)分離,從而產(chǎn)生熒光信號(hào)。

DNA 聚合酶:負(fù)責(zé)在引物的引導(dǎo)下,將脫氧核苷酸(dNTPs)逐個(gè)添加到引物的 3' 端,合成新的 DNA 鏈。

dNTPs:即脫氧核苷三磷酸,包括 dATP、dTTP、dCTP 和 dGTP,是合成 DNA 的原料。

反應(yīng)緩沖液:為 PCR 反應(yīng)提供適宜的 pH 值、離子強(qiáng)度等環(huán)境條件,保證 DNA 聚合酶的活性和反應(yīng)的順利進(jìn)行。

常見(jiàn)類(lèi)型

TaqMan 探針?lè)ㄔ噭┖校篢aqMan 探針是一種寡核苷酸探針,其 5' 端標(biāo)記熒光報(bào)告基團(tuán),3' 端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。在 PCR 擴(kuò)增過(guò)程中,Taq DNA 聚合酶的 5'-3' 外切酶活性會(huì)將與目標(biāo)序列結(jié)合的探針切割,使熒光報(bào)告基團(tuán)和淬滅基團(tuán)分離,熒光信號(hào)增強(qiáng)。通過(guò)檢測(cè)熒光信號(hào)的強(qiáng)度,可以實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè) PCR 產(chǎn)物的擴(kuò)增情況。

分子信標(biāo)探針?lè)ㄔ噭┖校悍肿有艠?biāo)是一種具有發(fā)夾結(jié)構(gòu)的寡核苷酸探針,其兩端分別標(biāo)記熒光報(bào)告基團(tuán)和淬滅基團(tuán)。在沒(méi)有目標(biāo)序列存在時(shí),分子信標(biāo)呈發(fā)夾結(jié)構(gòu),熒光報(bào)告基團(tuán)和淬滅基團(tuán)靠近,熒光信號(hào)被淬滅。當(dāng)存在目標(biāo)序列時(shí),分子信標(biāo)與目標(biāo)序列雜交,發(fā)夾結(jié)構(gòu)打開(kāi),熒光報(bào)告基團(tuán)和淬滅基團(tuán)分離,產(chǎn)生熒光信號(hào)。

2. 樣品制備

DNA提取:使用適合的DNA提取試劑he提取待測(cè)樣品中的DNA,確保DNA的純度和完整性。

樣品處理:樣品需在0-4℃條件下處理,避免RNA降解,并在實(shí)驗(yàn)后立即檢測(cè)或儲(chǔ)存于-20℃。

3. 反應(yīng)體系構(gòu)建

反應(yīng)管標(biāo)記:根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求,標(biāo)記N+9或N+4個(gè)PCR管,其中N為樣品數(shù)量,+9或+4分別用于標(biāo)準(zhǔn)曲線、陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照。

加入試劑:

每孔加入25μL反應(yīng)體系,包括模板DNA、引物、探針、dNTPs、Taq酶等。

陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照分別加入不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品或無(wú)DNA的溶液。

4. PCR擴(kuò)增

初始變性:95℃預(yù)變性3分鐘。

循環(huán)擴(kuò)增:

溫度設(shè)置:95℃(變性)15秒,60℃(退火)30秒,72℃(延伸)1分鐘。

循環(huán)次數(shù):通常為40次,每次循環(huán)后收集熒光信號(hào)。

熒光信號(hào)檢測(cè):在60℃退火階段收集FAM通道的熒光信號(hào),實(shí)時(shí)監(jiān)控?cái)U(kuò)增過(guò)程。

5. 數(shù)據(jù)分析

定量分析:

繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線:以陽(yáng)性對(duì)照濃度的log值為橫軸,Ct值為縱軸,計(jì)算待測(cè)樣品的DNA濃度。

根據(jù)待測(cè)樣品的Ct值推算其濃度。

定性分析:

陰性對(duì)照無(wú)Ct值或Ct值≥40,陽(yáng)性對(duì)照有典型擴(kuò)增曲線且Ct值<40,待測(cè)樣品根據(jù)Ct值判斷陽(yáng)性或陰性。

6. 結(jié)果驗(yàn)證

必要時(shí)進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn):如凝膠電泳檢測(cè)PCR產(chǎn)物大小,確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。

注意事項(xiàng)

實(shí)驗(yàn)環(huán)境:實(shí)驗(yàn)應(yīng)在超凈工作臺(tái)或生物安全柜內(nèi)進(jìn)行,避免污染。

個(gè)人防護(hù):佩戴一次性手套、口罩和無(wú)塵工作服,避免直接接觸試劑。

試劑保存:所有試劑需避光保存,避免反復(fù)凍融。

廢棄物處理:實(shí)驗(yàn)后廢棄物需無(wú)害化處理

歡迎新老客戶垂詢訂購(gòu): 齒瓣石斛探針?lè)晒舛縋CR試劑盒

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