熱敏雙鏈DNA特異性核酸酶(HL dsDNase)試劑，又名ezDNase或HL dsDNase)，為雙鏈特異性核酸酶。

它可特異性地識別降解雙鏈DNA，對單鏈DNA或RNA幾乎無活性，其降解dsDNA的能力比ssDNA高~5000倍。此外，

該雙鏈DNA特異性核酸酶降解雙鏈DNA的能力比bovine DNaseI高~30倍，從而特別適用于去除RNA樣品中的基因組DNA污染

。該熱敏雙鏈DNA核酸酶可將DNA降解為2~8bp的產(chǎn)物，且55℃ 5min可使該酶不可逆失活，

同時(shí)又能保持RNA和ssDNA的穩(wěn)定性。另外，該酶適合于對基因組樣品進(jìn)行酶法片段化反應(yīng)。

單位定義

1單位指25°C條件下15min將10μg基因組DNA消化至80%的產(chǎn)物<500bp所需的酶量。

組分

名稱數(shù)量

HL dsDNase (2 U/μl)50 μl/500 μl

10×dsDNase Buffer1 ml /2 ml

儲存

置于-20°C，可保存3年。

使用注意事項(xiàng)

（1）1×dsDNase Buffer：20mM Tris-HCl pH8.0, 5mM MgCl2。該酶需要1~5mM MgCl2。

（2）該酶對K+敏感，反應(yīng)體系中推薦K+濃度低于40 mM。

（3）通常在RT反應(yīng)中的用量為0.1~0.5U/20 μl體系。

（4）任何濃度的SDS、鹽酸胍均抑制該酶活性。

（5）該酶的最佳反應(yīng)溫度為25~37℃，42℃ 30min后活性損失70%。

熱敏雙鏈DNA特異性核酸酶(HL dsDNase)試劑恒溫?cái)U(kuò)增使用策略及實(shí)例展示

應(yīng)用實(shí)例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標(biāo)準(zhǔn)定量PCR儀或恒溫?zé)晒鈨x上進(jìn)行反應(yīng)。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)25min的檢測結(jié)果，可以看到檢測反應(yīng)<20min(達(dá)平臺期)。

應(yīng)用實(shí)例2： 用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測試。OG變色法為終點(diǎn)變色策略，在反應(yīng)結(jié)束后，倒置反應(yīng)管，溶解管蓋上染料后，陽性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色，陰性表現(xiàn)出橙色，區(qū)分明顯。且該方法不受樣本類型限制，雜質(zhì)耐受性很好。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)20min后檢測結(jié)果。

應(yīng)用實(shí)例3：A3825-01 紅黃變色反應(yīng)（肉眼觀察）

以 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起

始前，下圖為 65 度反應(yīng) 30min 后。

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