ORF1ab LAMP Primer Set試劑在核酸分子的恒溫擴(kuò)增過程中，無論采用LAMP、CPA等擴(kuò)增技術(shù)，這種高速度的擴(kuò)增特性，均不可避免的引起假陽性擴(kuò)增。

這種假陽性的擴(kuò)增情況在LAMP擴(kuò)增中表現(xiàn)尤為明顯，由于LAMP擴(kuò)增用到很高濃度的引物，因此難免保證有少量錯配和引物

Dimer，這些輕微的污染都會導(dǎo)致在LAMP高速擴(kuò)增中造成假陽性。HaiGene優(yōu)化的反應(yīng)緩沖液，配合的顯色技術(shù)和陰性

控制技術(shù)建立的預(yù)混恒溫mix系列產(chǎn)品，可高靈敏度、高特異性的用于LAMP pH變色、橙綠（OG）變色、HNB變色、

SYBR Green熒光檢測。在LAMP擴(kuò)增實驗中，與其它公司提供的LAMP Mix相比，得益于 Bst 4.0 DNA/RNA聚合酶的出色性能

，Bst 4.0 Mix具有更快的擴(kuò)增速度和雜質(zhì)耐受性。

Bst 4.0 MasterMix及凍干微球系列特點

 SYBR GreenHNB變色基于pH指示變色橙綠變色

檢測方法定量PCR或 恒溫?zé)晒鈨x裸眼觀察裸眼觀察裸眼觀察

顯色染料SYBR GreenHNB染料pH指示染料OG染料

陽性判讀方式擴(kuò)增曲線天藍(lán)色為陽性黃色為陽性綠色為陽性

反應(yīng)時間15-25min20-35min20-30min15-25min

靈敏度（copies/test）5-25 copies5-50 copies5-50 copies5-50 copies

抗雜質(zhì)能力強強對樣本ph敏感強

緩沖鹽耐受性強強非常低強

恒溫擴(kuò)增使用策略及實例展示

應(yīng)用實例1：A3825-01 紅黃變色反應(yīng)（肉眼觀察）

以 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起始前，下圖為 65 度反應(yīng) 30min 后。

應(yīng)用實例2：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標(biāo)準(zhǔn)定量PCR儀或恒溫?zé)晒鈨x上進(jìn)行反應(yīng)。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)25min的檢測結(jié)果，可以看到檢測反應(yīng)<20min(達(dá)平臺期)。

應(yīng)用實例3： 用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測試。OG變色法為終點變色策略，在反應(yīng)結(jié)束后，倒置反應(yīng)管，溶解管蓋上染料后，陽性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色，陰性表現(xiàn)出橙色，區(qū)分明顯。且該方法不受樣本類型限制，雜質(zhì)耐受性很好。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)20min后檢測結(jié)果。

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A3828-03Bst 4.0 SYBR Green Bead

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A3831-05HotStart Bst 4.2 Red Bead(紅黃變色凍干球)

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