細胞名稱：人腦微血管內皮細胞hCMEC/D3ATCC

細胞代次：P4

細胞規格：T25瓶（包郵）/2冷凍管（需加干冰運輸費）

細胞凍存：無血清凍存液

細胞傳代：第一次建議1:2

1、您收到細胞后，請按照以下方法進行操作：

取出25cm2培養瓶，75%酒精擦拭培養瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2細胞培養箱中靜置3-4小時以穩定細胞狀態，然后換用新鮮*培養液繼續培養或進行傳代。

2、細胞傳代：

1）細胞生長至覆蓋培養瓶的80%面積時，棄25cm2培養瓶中的培養液，用PBS清洗細胞一次；

2）添加0.25%Y蛋白酶消化液約1ml至培養瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入*培養液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3）棄上清，沉淀細胞用12ml*培養基重懸，然后按1:2比例進行分瓶傳代，zui后放入37℃，5%CO2細胞培養箱中培養；

4）待細胞*貼壁后，觀察培養結果，之后進行換液培養或傳代。

3、細胞凍存：

1）細胞生長至覆蓋培養瓶的80%面積時，棄25cm2培養瓶中的培養液，用PBS清洗細胞一次；

2）添加0.25%Y蛋白酶消化液約1ml至培養瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入*培養液終止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞，并放置于凍存管中；

4）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h后轉入液氮中進行長期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。

4、細胞復蘇：

1）從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；

2）將凍存管中的細胞移至含5ml*培養基的15ml離心管中， 1000rpm離心5min；

3）棄上清，沉淀用5ml*培養基重懸，接種25cm2培養瓶，于37℃，5%CO2細胞培養箱中培養；

4）第二天，換用新鮮*培養基繼續培養。

原代細胞與細胞系有什么區別？細胞培養物來源于原代外植體或分散的細胞懸液。通常在這樣的培養物中細胞增殖形成匯合地單層細胞或密集地細胞懸液。根據傳統定義，*次收獲和接種的細胞被稱為原代細胞[Freshney, R.I. (1987). Culture of Animal Cells. A Manual of Basic Technique. (New York, Alan R. Liss, Inc.)]. 這類細胞生命周期有限，在有限的生命周期內需掌握好細胞zui大的生長空間，以保持細胞群中基因型和表型的*性。細胞系是不斷生長，分化的細胞群，因其經過遺傳改造，致使其具有無限增長的潛能。體外生長的細胞系用于醫療或科研。實際上，連續細胞系可以用大量次培養基培養，隨著代數的增加細胞的基因型和表型都有可能發生改變。需要指出的是，在不同的科研小組中這些術語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經過了遺傳改造。

1、倍增和代數有什么區別？倍增是培養物中細胞總數加倍，通常是指細胞指數或對數生長期。代數是指細胞群從培養瓶中移出，傳代培養過程的次數，傳代培養的目的是使細胞處于低密度以刺激其進一步生長。

2、接收到的凍存細胞該如何處理？收到包裝箱后，立即將凍存細胞從干冰移入液氮中凍存。此過程盡量快以避免升溫。不要將細胞儲存在-80℃，這樣會對細胞造成不可挽回的傷害。

3、有多少經驗才能開始正常人類細胞培養？推薦有經驗者在無菌環境下用層流凈化罩工作，如果有經驗的話對其它細胞類型也是很有利的。如果你是細胞培養的初學者或打算建立細胞培養實驗室，我們會為你提供幫助。請的細胞培養專家。

售后服務告知書

1）細胞出現問題，可重發的情況有哪些？判定標準是什么？

1. 細胞運輸途中遭遇的各種問題，細胞丟失、瓶身破損、培養液嚴重漏液等，重發；

2. 細胞污染問題，請在收到產品48小時內，給我們提出真實的實驗結果，核實后重發；

3. 常溫發貨的細胞靜置24小時后，干冰凍存發貨的細胞復蘇后24小時后，絕大多數細胞未存活，（需提供真實清晰的細胞狀態照片），重發；

4. 干冰凍存發貨的細胞復蘇后24小時后或常溫發貨的細胞靜置4小時候并且未開封，出現污染，重發；

5. 細胞活性問題，請在收到產品7天內給我們提出真實的實驗結果，用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，核實后予重發；

6. 細胞收到當天以及第2,3天請拍照，3天未告知的，視為產品合格。4-7天內出現問題有提供收到細胞前3天照片和細胞出現問題時照片以及細胞相關操作的詳細步驟的，并跟技術人員溝通的，由技術人員判定為我方責任的，重發。技術人員判定為雙方承擔責任的由雙方進行協商處理或者按合同價的50%收費重發。

二）細胞出現問題，不予以重發的情況有哪些？

1. 客戶造成細胞污染，不重發；

2. 客戶不正確操作致細胞狀態不好，不重發；

3. 非本庫推薦細胞培養體系致的細胞狀態不好，不重發；

4. 細胞狀態不好，未提供細胞培養前3天照片的，不重發；

5. 細胞培養時經其它處理的，不重發；

6. 細胞收到2天內，未告知，不重發；

7. 視具體情況而定。

YS4846C人成纖維細胞GM00526

YS4847C人B淋巴細胞GM50152

YS4848C卵巢癌細胞caov-4

YS4849C褐家鼠腦海馬體成纖維細胞H19-7/IGF-IR

YS4850C小鼠主動脈血管平滑肌細胞MOVAS

YS4851C小鼠視網膜神經節細胞RGC-5

YS4852C小細胞肺癌細胞DMS53

YS4853C肺間皮瘤細胞NCI-H2052

YS4854C人直腸腺癌細胞SW1463

YS4855C人表皮樣癌細胞A-431-LUC2

YS4856CIL-10報告293細胞IL-10ReporterHEK293Cells

YS4857C人肺腺癌腫瘤相關成纖維細胞HUMAN LUNG ADENOCARCINOMA CAFS

YS4858CNFAT-Luc 報告基因 T 淋巴細胞Jurkat-Lucia NFAT Cells

YS4859C牙骨質IDG-CM6

YS4860C人B細胞淋巴瘤ri-1

YS4861C卵巢腺癌細胞EFO-27

YS4862C人多發性骨髓瘤細胞KMS-12-PE

YS4863C胰腺腺癌細胞T3M-4

YS4864C人胰腺導管癌細胞MIA PaCa-2

YS4865C成人急性髓系白血病細胞SKM-1

YS4866C小鼠淋巴母細胞b淋巴細胞TC1

YS4867C小鼠髓樣乳腺癌貼壁細胞EO771

YS4868C小鼠淋巴瘤細胞L5178YTK

YS4869C小鼠胚胎成纖維細胞3T3-swissalbino

YS4870C小鼠肥大細胞瘤細胞P815

YS4871C人黑色素瘤細胞A375.S2

YS4872C肺支氣管癌ChaGo-K-1

YS4873CRAW-Dual CellsRAW-Dual

YS4874C人前列腺癌細胞MDA-PCA-2B

YS4875C人T淋巴細胞白血病細胞C8166（C8166-CD4）

YS4876C人胚胎腎細胞293T

YS4877C小細胞肺癌細胞NCI-H889

YS4878C大鼠肺泡Ⅱ型細胞RLE-6TN

YS4879C人縱狀神經纖維瘤細胞hTERT ipNF95.6

YS4880C人食道癌腫瘤細胞Colo680N

YS4881C口腔舌鱗狀細胞癌細胞CAL-33

YS4882C小鼠肺腺癌細胞系LA795

YS4883C腦星形細胞瘤SW1783

YS4884C小鼠T淋巴細胞CTLL-2

YS4885C人甲狀腺癌細胞ACT-1

YS4886C人肝癌細胞JHH4

YS4887C唐氏綜合癥背景羊水來源細胞GM03606

YS4888C膀胱癌細胞Ku1919

YS4889C肺癌大細胞瘤HCC1438

YS4890C人卵巢癌細胞OVCAR-8

YS4891C惡性黑色素瘤細胞Malme3M

YS4892C小鼠骨髓瘤雜交瘤細胞BB7.1

YS4893C小鼠骨髓瘤雜交瘤細胞ME 1

YS4894C小鼠骨髓瘤雜交瘤細胞BBM.1

YS4895C小鼠骨髓瘤雜交瘤細胞L243

YS4896C小鼠骨髓瘤雜交瘤細胞4E11

YS4897C小鼠骨髓瘤雜交瘤細胞BB7.7

YS4898C小鼠骨髓瘤雜交瘤細胞IGG-6A6

YS4899C小鼠骨髓瘤雜交瘤細胞9.3F10

YS4900C小鼠神經干細胞NE-GFP-4C

YS4901C人成纖維細胞GM00325

YS4902C羊水衍生細胞GM02422

YS4903C小鼠胚胎瘤細胞ATDC5

YS4904C人肝細胞THLE-3

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