細胞名稱：小鼠成纖維細胞L Wnt-3AATCC

細胞代次：P4

細胞規(guī)格：T25瓶（包郵）/2冷凍管（需加干冰運輸費）

細胞凍存：無血清凍存液

細胞傳代：第一次建議1:2

1、您收到細胞后，請按照以下方法進行操作：

取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4小時以穩(wěn)定細胞狀態(tài)，然后換用新鮮*培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)或進行傳代。

2、細胞傳代：

1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次；

2）添加0.25%Y蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3）棄上清，沉淀細胞用12ml*培養(yǎng)基重懸，然后按1:2比例進行分瓶傳代，zui后放入37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4）待細胞*貼壁后，觀察培養(yǎng)結果，之后進行換液培養(yǎng)或傳代。

3、細胞凍存：

1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次；

2）添加0.25%Y蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞，并放置于凍存管中；

4）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h后轉入液氮中進行長期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。

4、細胞復蘇：

1）從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；

2）將凍存管中的細胞移至含5ml*培養(yǎng)基的15ml離心管中， 1000rpm離心5min；

3）棄上清，沉淀用5ml*培養(yǎng)基重懸，接種25cm2培養(yǎng)瓶，于37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4）第二天，換用新鮮*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

原代細胞與細胞系有什么區(qū)別？細胞培養(yǎng)物來源于原代外植體或分散的細胞懸液。通常在這樣的培養(yǎng)物中細胞增殖形成匯合地單層細胞或密集地細胞懸液。根據傳統定義，*次收獲和接種的細胞被稱為原代細胞[Freshney, R.I. (1987). Culture of Animal Cells. A Manual of Basic Technique. (New York, Alan R. Liss, Inc.)]. 這類細胞生命周期有限，在有限的生命周期內需掌握好細胞zui大的生長空間，以保持細胞群中基因型和表型的*性。細胞系是不斷生長，分化的細胞群，因其經過遺傳改造，致使其具有無限增長的潛能。體外生長的細胞系用于醫(yī)療或科研。實際上，連續(xù)細胞系可以用大量次培養(yǎng)基培養(yǎng)，隨著代數的增加細胞的基因型和表型都有可能發(fā)生改變。需要指出的是，在不同的科研小組中這些術語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經過了遺傳改造。

1、倍增和代數有什么區(qū)別？倍增是培養(yǎng)物中細胞總數加倍，通常是指細胞指數或對數生長期。代數是指細胞群從培養(yǎng)瓶中移出，傳代培養(yǎng)過程的次數，傳代培養(yǎng)的目的是使細胞處于低密度以刺激其進一步生長。

2、接收到的凍存細胞該如何處理？收到包裝箱后，立即將凍存細胞從干冰移入液氮中凍存。此過程盡量快以避免升溫。不要將細胞儲存在-80℃，這樣會對細胞造成不可挽回的傷害。

3、有多少經驗才能開始正常人類細胞培養(yǎng)？推薦有經驗者在無菌環(huán)境下用層流凈化罩工作，如果有經驗的話對其它細胞類型也是很有利的。如果你是細胞培養(yǎng)的初學者或打算建立細胞培養(yǎng)實驗室，我們會為你提供幫助。請的細胞培養(yǎng)專家。

售后服務告知書

1）細胞出現問題，可重發(fā)的情況有哪些？判定標準是什么？

1. 細胞運輸途中遭遇的各種問題，細胞丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴重漏液等，重發(fā)；

2. 細胞污染問題，請在收到產品48小時內，給我們提出真實的實驗結果，核實后重發(fā)；

3. 常溫發(fā)貨的細胞靜置24小時后，干冰凍存發(fā)貨的細胞復蘇后24小時后，絕大多數細胞未存活，（需提供真實清晰的細胞狀態(tài)照片），重發(fā)；

4. 干冰凍存發(fā)貨的細胞復蘇后24小時后或常溫發(fā)貨的細胞靜置4小時候并且未開封，出現污染，重發(fā)；

5. 細胞活性問題，請在收到產品7天內給我們提出真實的實驗結果，用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，核實后予重發(fā)；

6. 細胞收到當天以及第2,3天請拍照，3天未告知的，視為產品合格。4-7天內出現問題有提供收到細胞前3天照片和細胞出現問題時照片以及細胞相關操作的詳細步驟的，并跟技術人員溝通的，由技術人員判定為我方責任的，重發(fā)。技術人員判定為雙方承擔責任的由雙方進行協商處理或者按合同價的50%收費重發(fā)。

二）細胞出現問題，不予以重發(fā)的情況有哪些？

1. 客戶造成細胞污染，不重發(fā)；

2. 客戶不正確操作致細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；

3. 非本庫推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；

4. 細胞狀態(tài)不好，未提供細胞培養(yǎng)前3天照片的，不重發(fā)；

5. 細胞培養(yǎng)時經其它處理的，不重發(fā)；

6. 細胞收到2天內，未告知，不重發(fā)；

7. 視具體情況而定。

YS4153C人急性骨髓性白血病細胞KG-1

YS4154C人彌漫性大B細胞淋巴瘤細胞Toledo

YS4155C人淋巴瘤細胞BC-3

YS4156C人黑色素瘤細胞MeWo

YS4157C人T淋巴瘤細胞SUP-T1

YS4158C人食管上皮細胞Het-1A

YS4159C人乳腺癌細胞AU565

YS4160C人成神經瘤細胞-骨髓SK-N-DZ

YS4161C人乳腺上皮細胞DU4475

YS4162CALK 陽性間變性大細胞淋巴瘤SU-DHL-1

YS4163C人肺腺鱗癌細胞NCI-H596

YS4164C人乳腺導管癌細胞BT-483

YS4165C人乳腺導管癌細胞HCC1500

YS4166C人盲腸癌細胞LS411N

YS4167C人細支氣管肺泡癌細胞NCI-H1781

YS4168C人非小細胞肺癌細胞NCI-H1581

YS4169C人卵巢癌細胞UWB1.289+BRCA1

YS4170C人大腦內皮細胞HBEC-5i

YS4171C人多發(fā)性骨髓瘤細胞HuNS1

YS4172C人支氣管上皮樣細胞HBE135-E6E7

YS4173C人肺微血管內皮細胞HULEC-5a

YS4174C彌漫型大b細胞淋巴瘤細胞DB

YS4175C源于293，包病毒做轉錄，兩性轉錄2A

YS4176C人卵巢透明細胞癌細胞ES-2

YS4177C人胚肺成纖維細胞MRC-5

YS4178C人B細胞非霍奇金淋巴瘤細胞RL

YS4179C人脾細胞MD

YS4180C人B淋巴瘤細胞RC

YS4181C人主動脈內皮細胞TeloHAEC

YS4182C小鼠皮下結締組織細胞L-WRN

YS4183C小鼠小腸內分泌細胞系STC-1

YS4184C人胚腎細胞293T/17 SF

YS4185C小鼠腎系膜細胞RMC

YS4186C小鼠腎小管上皮細胞TCMK-1

YS4187C大鼠正常腎成纖維細胞NRK-49F

YS4188C正常人腸上皮細胞HIEC-6

YS4189C人纖維肉瘤細胞SW 684

YS4190C人逆轉錄病毒包裝細胞系Phoenix-ECO

YS4191C人舌鱗狀細胞癌BICR3

YS4192C人食管癌細胞OE19

YS4193C人結直腸腫瘤成纖維細胞CAF05HUMAN COLORECTAL TUMOR CAFS（CAF05）

YS4194C小鼠結腸癌細胞 CT26.WT

YS4195C小鼠成纖維細胞NCTC clone 929

YS4196C小鼠成纖維細胞L Wnt-3A

YS4197C大鼠甲狀腺髓樣癌細胞CA-77

YS4198C小鼠血管內皮瘤細胞EOMA

YS4199C小鼠惡性乳腺癌細胞Py230

YS4200C人胃癌細胞SNU-620

YS4201C人胃癌細胞SNU-601

YS4202C鱗狀細胞癌，扁平上皮癌細胞SNU-1066

YS4203C鱗狀細胞癌，扁平上皮癌細胞SNU-46

YS4204C人黑色素瘤細胞MNT-1

YS4205C小鼠胚胎成纖維細胞3T3-L1

YS4206C穩(wěn)定表達RspoI蛋白的293T細胞HA-R-Spondin1-Fc 293T cells

YS4207C霍奇金淋巴瘤細胞Hs 611.T

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